Bakteerien oksidaasiaktiivisuus

Työssä tutkitaan mikrobeja ja niiden energia-aineenvaihdunnan entsyymejä. Oksidaasites- tillä pystytään toteamaan sytokromi c-oksidaasi –entsyymin (COX) läsnäolo. Se on yksi elektroninsiirtoketjun entsyymeistä, jota löytyy myös tumallisten eliöiden mitokondrioista. COX oksidaasi vastaanottaa elektroninsiirtoketjun elektronit sytokromi c:ltä ja siirtää ne hapelle. Reaktiossa muodostuu vettä.

Työssä käytettävä menetelmä perustuu siihen, että bakteerien elektroninsiirtoketjussa ole- va COX pystyy hapettamaan kellertävän N,N,N,N-tetrametyyli-1,4-fenyleenidiamiinin (TMPD) violetiksi reaktiotuotteeksi. Reaktiossa tarvitaan lisäksi happea. TMPD hapettuu ilman hapen vaikutuksesta myös itsestään, joten sitä säilytetään ilmatiiviissä ampulleissa.

Anaerobisilla bakteereilla ei tyypillisesti ole oksidaasiaktiivisuutta, sillä niillä ei ole myös- kään elektroninsiirtoketjun entsyymejä. Joillakin bakteereilla COX:n korvaa elektroninsiir- toketjussa toinen entsyymi, joten myös ne ovat oksidaasinegatiivisia. Esimerkiksi monet suolistobakteerit ovat oksidaasinegatiivisia, mutta silti aerobisia tai fakultatiivisia bakteere- ja.

Lataa työohje muokattavassa docx-muodossa tästä.

Lataa työohje tulostettavassa pdf-muodossa tästä.